Лаборатория систем биосинтеза природных соединений

Версия 11:01, 4 ноября 2009

Состав:

И.о. зав. лаборатории, к.б.н. Шелудько Юрий Всеволодович
н.с., к.б.н. Герасименко Ирина Михайловна
ведущий инженер, к.б.н. Синдаровская Яна Рудольфовна
ведущий инженер Головач Илья Сергеевич
аспирант, инженер 1 кат. Мазур Мария Григорьевна

Основные направления работы:

• создание систем для экспрессии фармацевтических белков, в частности интерферона человека альфа2b, туберкулезных антигенов Ag85b и ESAT6 и ряда других. Такие системы могут служить источником биологически-активных белковых продуктов или использоваться как съедобные вакцины.
  

Была проведена Agrobacterium-опосредованная генетическая трансформация эксплантов модельного (табак) и сельскохозяйственных (салат, рапс) видов растений. После селекции на питательных средах, содержащих фосфинотрицин, были отобраны потенциально трансгенные растения табака салата и рапса. Присутствие гена интерферона, а также отсутствие агробактериальной контаминации были подтверждены с помощью дуплексного ПЦР-анализа для всех отобранных линий табака и салата и для 19 линий рапса.
С экстрактами растений салата, табака и рапса был проведен тест на способность угнетать цитопатическое действие вируса везикулярного стоматита в фибробластах человека. Наилучшие результаты были получены для растений салата и рапса. Максимальное значение антивирусной активности в экстрактах трансгенного рапса составляло около 4000 МЕ/г биомассы. Экстракты растений табака и салата тоже обладали антивирусным действием, хотя значение активности интерферона в растениях этих видов было ниже (около 1000 МЕ/г биомассы).

• Создание векторных систем, которые могут быть использованы для введения в растительную клетку и эффективной экспрессии чужеродных генов. Проведение транзиентной (временной) экспрессии чужеродных генов в растениях.
  

Agrobacterium-опосредствованная транзиентная экспрессия чужеродных генов в растениях дает возможность быстро получать рекомбинантные белки. С использованием гена репортерного белка GFP в ИКБГИ НАН Украины разработана методика эффективной транзиентной экспрессии генов in planta, проведен отбор видов растений, наиболее пригодных для транзиентной экспрессии рекомбинантных белков, и получены препаративные количества репортерного белка. Проведена инфильтрация растений N. benthamiana и N. excelsior линиями агробактерй, которые содержали векторные конструкции для транзиентной экспрессии генов интерферона. Показано наличие биологической активности интерферона человека в образцах экстрактов растений, в которых были експресованы конструкции, содержавшие соответствующий ген.

• Исследование клеточных линий с целью поиска вторичных метаболитов с биологической активностью. Исследование биохимических путей вторичного метаболизма. Мониторинг изменений спектра вторичных метаболитов в результате элиситации и стресса с использованием методов ВЭЖХ. Фракционирование экстрактов, изоляция и идентификация отдельных соединений.