Публикация:Кищенко ЕМ (2006) Получение трансгенних растений сахарной свеклы и изучение...

Материал из ИКБГИ
(Различия между версиями)
Перейти к: навигация, поиск
(Новая: Кищенко Е.М. (2009) Получение трансгенних растений сахарной свеклы и изучение экспрессии перенесенны...)
 
Строка 4: Строка 4:
 
Диссертация на соискание ученой степени кандидата биологических наук по специальности 03.00.20 – биотехнология. Институт клеточной биологии и генетической инженерии НАН Украины, Киев, 2006.
 
Диссертация на соискание ученой степени кандидата биологических наук по специальности 03.00.20 – биотехнология. Институт клеточной биологии и генетической инженерии НАН Украины, Киев, 2006.
  
В диссертационной работе предложены новые подходы к получению трансгенних растений сахарной свеклы с помощью Agrobacterium rhizogenes и A. tumefaciens. В результате серии проведенных исследований были подобраны условия процесса генетической трансформации с помощью A. tumefaciens, оптимальная система регенерации и стратегия селекции трансформированных клеток сахарной свеклы.
+
В диссертационной работе предложены новые подходы к получению трансгенних растений сахарной свеклы с помощью ''Agrobacterium rhizogenes'' и ''A. tumefaciens''. В результате серии проведенных исследований были подобраны условия процесса генетической трансформации с помощью ''A. tumefaciens'', оптимальная система регенерации и стратегия селекции трансформированных клеток сахарной свеклы.
  
При генетической трансформации сахарной свеклы, опосредованной A. rhizogenes, были получены трансгенные растения и культуры «бородатых корней». Обнаружено, что процесс инициации культуры Ri-корней более чувствительный к селективным агентам, чем поддержание роста корневых культур. Показана возможность получения после трансформации A. rhizogenes трансгенних растений сахарной свеклы путем прямой регенерации без стадии «бородатых корней». Полученные трансгенные растения имеют нормальный фенотип и содержат только Т-ДНК бинарного вектора. Экспрессия репортерного gusA гена наблюдалась у 90% полученных корневых культур и 25% отобранных канамицинустойчивых растений. В первичном каллусе, индуцированном по срезам черешков GUS-негативных растений, была обнаружена активность глюкуронидазы, что позволяет предположить, что прохождение клетками стадии каллусогенеза способствует активации «молчащих» трансгенов.
+
При генетической трансформации сахарной свеклы, опосредованной ''A. rhizogenes'', были получены трансгенные растения и культуры «бородатых корней». Обнаружено, что процесс инициации культуры Ri-корней более чувствительный к селективным агентам, чем поддержание роста корневых культур. Показана возможность получения после трансформации ''A. rhizogenes'' трансгенних растений сахарной свеклы путем прямой регенерации без стадии «бородатых корней». Полученные трансгенные растения имеют нормальный фенотип и содержат только Т-ДНК бинарного вектора. Экспрессия репортерного ''gus''A гена наблюдалась у 90% полученных корневых культур и 25% отобранных канамицинустойчивых растений. В первичном каллусе, индуцированном по срезам черешков GUS-негативных растений, была обнаружена активность β глюкуронидазы, что позволяет предположить, что прохождение клетками стадии каллусогенеза способствует активации «молчащих» трансгенов.
  
Разработана новая высокоэффективная и воспроизводимая методика генетической трансформации сахарной свеклы с помощью A. tumefaciens с применением вакуум-инфильтрации этиолированных проростков. Получены трансгенные растения сахарной свеклы линий опылителей О-типа украинской селекции с использованием разных селективных маркерных генов: генов устойчивости к антибиотикам канамицину и гигромицину В и гербициду фосфинотрицину. Частота генетической трансформации сахарной свеклы составляла 1-6% (1-6 трансгенных морфогенных каллусных клона на 100 исходных проростков) в зависимости от генотипа и селективного маркера. Предложенная методика генетической трансформации может быть успешно применена для переноса в геном сахарной свеклы трансгенов, которые имеют практический интерес или ценность для фундаментальных исследований.
+
Разработана новая высокоэффективная и воспроизводимая методика генетической трансформации сахарной свеклы с помощью ''A. tumefaciens'' с применением вакуум-инфильтрации этиолированных проростков. Получены трансгенные растения сахарной свеклы линий опылителей О-типа украинской селекции с использованием разных селективных маркерных генов: генов устойчивости к антибиотикам канамицину и гигромицину В и гербициду фосфинотрицину. Частота генетической трансформации сахарной свеклы составляла 1-6% (1-6 трансгенных морфогенных каллусных клона на 100 исходных проростков) в зависимости от генотипа и селективного маркера. Предложенная методика генетической трансформации может быть успешно применена для переноса в геном сахарной свеклы трансгенов, которые имеют практический интерес или ценность для фундаментальных исследований.
  
При агробактериальной трансформации сахарной свеклы конструкцией, содержащей сайт рекомбинации бактериофага Р1 lox, расположенный между правой граничной последовательностью Т-ДНК и стартовым кодоном беспромоторного bar гена, были получены трансгенные растения, устойчивые к фосфинотрицину как в условиях in vitro, так и ex vitro. Устойчивость растений к гербициду была соизмерима с устойчивостью, которая достигается при экспрессии bar гена под контролем конститутивного промотора гена нопалинсинтетазы. С помощью ПЦР, сопряженной с обратной транскрипцией, было показано, что в полученных трансгенних растениях сахарной свеклы, содержащих lox сайт перед кодирующей последовательностью гена bar, происходит экспрессия гена bar.
+
При агробактериальной трансформации сахарной свеклы конструкцией, содержащей сайт рекомбинации бактериофага Р1 ''lox'', расположенный между правой граничной последовательностью Т-ДНК и стартовым кодоном беспромоторного ''bar'' гена, были получены трансгенные растения, устойчивые к фосфинотрицину как в условиях ''in vitro'', так и ''ex vitro''. Устойчивость растений к гербициду была соизмерима с устойчивостью, которая достигается при экспрессии ''bar'' гена под контролем конститутивного промотора гена нопалинсинтетазы. С помощью ПЦР, сопряженной с обратной транскрипцией, было показано, что в полученных трансгенних растениях сахарной свеклы, содержащих ''lox'' сайт перед кодирующей последовательностью гена ''bar'', происходит экспрессия гена ''bar''.
  
В результате агробактериальной трансформации получены трансгенные растения и клеточные линии сахарной свеклы, содержащие Spm/dSpm систему транспозонов кукурузы. Показано, что гетерологичная система мобильных элементов Spm/dSpm сохраняет активность в геноме сахарной свеклы, что открывает возможность для клонирования генов и для получения трансгенных растений сахарной свеклы без селективных маркеров.
+
В результате агробактериальной трансформации получены трансгенные растения и клеточные линии сахарной свеклы, содержащие ''Spm/dSpm'' систему транспозонов кукурузы. Показано, что гетерологичная система мобильных элементов ''Spm/dSpm'' сохраняет активность в геноме сахарной свеклы, что открывает возможность для клонирования генов и для получения трансгенных растений сахарной свеклы без селективных маркеров.
  
  
  
 
===Ключевые слова===  
 
===Ключевые слова===  
сахарная свекла (Beta vulgaris L.), генетическая трансформация, Agrobacterium rhizogenes, Agrobacterium tumefaciens, устойчивость к гербицидам, экспрессия трансгенов, Cre/lox система рекомбинации бактериофага Р1, Spm/dSpm система транспозонов кукурузы.
+
сахарная свекла (''Beta vulgaris'' L.), генетическая трансформация, ''Agrobacterium rhizogenes'', ''Agrobacterium tumefaciens'', устойчивость к гербицидам, экспрессия трансгенов, Cre/''lox'' система рекомбинации бактериофага Р1, ''Spm/dSpm'' система транспозонов кукурузы.
  
 
===Полный текст===
 
===Полный текст===

Версия 16:47, 13 ноября 2010

Кищенко Е.М. (2009) Получение трансгенних растений сахарной свеклы и изучение экспрессии перенесенных генов. // Автореф. дис. ... канд. биол. наук. - Киев, 2006. - 22 с.

Анотация

Диссертация на соискание ученой степени кандидата биологических наук по специальности 03.00.20 – биотехнология. Институт клеточной биологии и генетической инженерии НАН Украины, Киев, 2006.

В диссертационной работе предложены новые подходы к получению трансгенних растений сахарной свеклы с помощью Agrobacterium rhizogenes и A. tumefaciens. В результате серии проведенных исследований были подобраны условия процесса генетической трансформации с помощью A. tumefaciens, оптимальная система регенерации и стратегия селекции трансформированных клеток сахарной свеклы.

При генетической трансформации сахарной свеклы, опосредованной A. rhizogenes, были получены трансгенные растения и культуры «бородатых корней». Обнаружено, что процесс инициации культуры Ri-корней более чувствительный к селективным агентам, чем поддержание роста корневых культур. Показана возможность получения после трансформации A. rhizogenes трансгенних растений сахарной свеклы путем прямой регенерации без стадии «бородатых корней». Полученные трансгенные растения имеют нормальный фенотип и содержат только Т-ДНК бинарного вектора. Экспрессия репортерного gusA гена наблюдалась у 90% полученных корневых культур и 25% отобранных канамицинустойчивых растений. В первичном каллусе, индуцированном по срезам черешков GUS-негативных растений, была обнаружена активность β глюкуронидазы, что позволяет предположить, что прохождение клетками стадии каллусогенеза способствует активации «молчащих» трансгенов.

Разработана новая высокоэффективная и воспроизводимая методика генетической трансформации сахарной свеклы с помощью A. tumefaciens с применением вакуум-инфильтрации этиолированных проростков. Получены трансгенные растения сахарной свеклы линий опылителей О-типа украинской селекции с использованием разных селективных маркерных генов: генов устойчивости к антибиотикам канамицину и гигромицину В и гербициду фосфинотрицину. Частота генетической трансформации сахарной свеклы составляла 1-6% (1-6 трансгенных морфогенных каллусных клона на 100 исходных проростков) в зависимости от генотипа и селективного маркера. Предложенная методика генетической трансформации может быть успешно применена для переноса в геном сахарной свеклы трансгенов, которые имеют практический интерес или ценность для фундаментальных исследований.

При агробактериальной трансформации сахарной свеклы конструкцией, содержащей сайт рекомбинации бактериофага Р1 lox, расположенный между правой граничной последовательностью Т-ДНК и стартовым кодоном беспромоторного bar гена, были получены трансгенные растения, устойчивые к фосфинотрицину как в условиях in vitro, так и ex vitro. Устойчивость растений к гербициду была соизмерима с устойчивостью, которая достигается при экспрессии bar гена под контролем конститутивного промотора гена нопалинсинтетазы. С помощью ПЦР, сопряженной с обратной транскрипцией, было показано, что в полученных трансгенних растениях сахарной свеклы, содержащих lox сайт перед кодирующей последовательностью гена bar, происходит экспрессия гена bar.

В результате агробактериальной трансформации получены трансгенные растения и клеточные линии сахарной свеклы, содержащие Spm/dSpm систему транспозонов кукурузы. Показано, что гетерологичная система мобильных элементов Spm/dSpm сохраняет активность в геноме сахарной свеклы, что открывает возможность для клонирования генов и для получения трансгенных растений сахарной свеклы без селективных маркеров.


Ключевые слова

сахарная свекла (Beta vulgaris L.), генетическая трансформация, Agrobacterium rhizogenes, Agrobacterium tumefaciens, устойчивость к гербицидам, экспрессия трансгенов, Cre/lox система рекомбинации бактериофага Р1, Spm/dSpm система транспозонов кукурузы.

Полный текст

Полный текст в формате pdf (укр)

Персональные инструменты