Розробка біотехнологічних підходів для видів із родини бобових /Fabaceae/

Матеріал з ІКБГІ
(відмінності між версіями)
Перейти до: навігація, пошук
Рядок 11: Рядок 11:
 
[[Зображення:Fabaceae 2 Protoplasts 300x192.jpg|frame|Перший клітинний поділ ізольованих протопластів мезофілу листків гороху після електропорації]]
 
[[Зображення:Fabaceae 2 Protoplasts 300x192.jpg|frame|Перший клітинний поділ ізольованих протопластів мезофілу листків гороху після електропорації]]
 
</div>
 
</div>
<div style='margin-right:10px;float:left;align:center;width:400px;height:400px;'>
+
<div style='margin-right:10px;float:left;align:center;width:400px;height:400px;border:colid;'>
[[Зображення:Fabaceae 3 Selection 300x263.jpg|frame|Селекція та регенерація стійких до канаміцину клітинних ліній гороху після бомбардування мікрочастинками золота]]
+
[[Зображення:Fabaceae 3 Selection 300x263.jpg|left|frame|Селекція та регенерація стійких до канаміцину клітинних ліній гороху після бомбардування мікрочастинками золота]]
 +
</div>
 +
<div style='margin-right:10px;float:left;align:center;width:400px;height:400px;border:colid;'>
 +
{|border=1 width=300 style='margin-left:40px;'
 +
!colspan=2|“Подвійна трансформація” видів з родини бобових
 +
|-
 +
|I
 +
|Отримання регенераційних ліній у бобових шляхом трансформації “shooty” мутантом Agrobacterium tumefaciens pGV2206
 +
|-
 +
|II
 +
|Трансформація отриманих регенераційних ліній “необхідним” геном
 +
|-
 +
|III
 +
|Сегрегація хромосом в T1 поколінні та відновлення вихідного генотипу, який несе  тільки “необхідний” ген
 +
|}
 
</div>
 
</div>

Версія за 19:17, 1 січня 2009

Розроблено спосіб виділення та культивування мезофільних протопластів люцерни мінливої (Medicago varia L.) та північної (M. borealis L.), конюшини лугової (Trifolium pratense L.), гороху посівного (Pisum sativum L.), люпину вузьколистого (Lupinus angustifolius L.), гороху голубиного (Cajanus cajan L.) та сої культурної (Glycine max L.). Використовуючи для трансформації “shooty” мутант A.tumefaciens pGV2206 отримано високорегенераційні лінії гороху та люцерни посівної (M. sativa L.). Розроблено методики трансформації ліній гороху, люцерни та сої за допомогою A.tumefaciens, електропорації протопластів та бомбардування мікрочастинками золота. За допомогою агробактеріальної трансформації отримано трансгенні рослини гороху, що містять гени Ac, nptII, Ds-елемент та gus; трансгенні рослини люцерни (M. lupuline L.), що містять ген nptII.

Високорегенераційна лінія гороху, отримана після генетичної трансформації “shooty” мутантом A.tumefaciens pGV2206

Використовуючи метод електропорації протопластів отримано трансгенні клітинні лінії та рослини гороху, що містять гени Ac, nptII, Ds-елемент та gus; трансгенні рослини люцерни (M. borealis L.) та клітинні лінії сої, що містять ген nptII. За допомогою методу бомбардування мікрочастинками золота отримано трансгенні рослини гороху, що містять гени nptII та gus. Стабільна інтеграція перенесених генів в геном отриманих клітинних ліній та рослин доведена за допомогою кількох молекулярно-біологічних та біохімічних методів: ПЛР, блотинг-гібридизації за Саузерном, NPT II ELISA, тесту на GUS-активність та визначення активності NPT. Перенесені в геном гороху гени Ac та npt II стабільно успадковуються та експресуються в наступних поколіннях.

Перший клітинний поділ ізольованих протопластів мезофілу листків гороху після електропорації
Селекція та регенерація стійких до канаміцину клітинних ліній гороху після бомбардування мікрочастинками золота
“Подвійна трансформація” видів з родини бобових
I Отримання регенераційних ліній у бобових шляхом трансформації “shooty” мутантом Agrobacterium tumefaciens pGV2206
II Трансформація отриманих регенераційних ліній “необхідним” геном
III Сегрегація хромосом в T1 поколінні та відновлення вихідного генотипу, який несе тільки “необхідний” ген
Особисті інструменти
Простори назв

Варіанти
Дії
 
   
Інструменти