Публікація:Глеба Ю.Ю., Сытник К.М. (1984) Клеточная инженерия растений

Матеріал з ІКБГІ
Перейти до: навігація, пошук
Ю.Ю. Глеба, К.М. Сытник. Клеточная инженерия растений

Глеба Ю.Ю., Сытник К.М. Клеточная инженерия растений / АН УССР. Ин-т ботаники им. Н. Г. Холодного. - Киев: - Наук. думка, 1984. - 160 с.
УДК 575.1

Монография — первый в отечественной литературе оригинальный труд по генетической (клеточной) инженерии растений. В нем освещаются исследования по клеточной биотехнологии и по соматической гибридизации растений. Раскрываются возможности использования приемов клеточной инженерии для анализа организации генома растительной клетки и создания важных в практическом отношении новых форм растений.
Для генетиков, физиологов растений, преподавателей и студентов вузов.
Табл. 18. Библиогр.: с. 141-153.

Введение

Своими сегодняшними представлениями о механизмах жизнедеятельности организмов мы обязаны прежде всего необычайным достижениям таких биологических наук, как молекулярная биология, биохимия и цитология. При всех различиях между названными науками имеется и нечто их объединяющее и обеспечившее эффективность этих дисциплин на определенном этапе развития биологии. Этим нечто является общий методологический подход, который можно охарактеризовать как аналитический. Сущность его сводится к следующему: 1) целое разъединяют на составные части и исследуют свойства частей; 2) на основании данных о поведении частей впоследствии делают вывод о роли части в контексте целого. Эта вторая фаза исследования (воссоединение целого из частей) является чисто мысленной, эксперимент же сводится к разрушению целого (гомогенизация тканей, клеток в биохимических исследованиях, фиксация клеток и приготовление срезов из них в цитологическом опыте), выделению той или иной части (фракционирование органелл, молекул, выбор срезов и т. д.) и изучению свойств этой части.

Очевидно, что наиболее строгой проверкой правильности наших сведений, добытых при анализе свойств субклеточных частиц и молекул, был бы эксперимент по реконструкции функционирующего целого (клетки и/или многоклеточного организма) из клеточных макромолекул и органелл. Такой эксперимент, однако, на сегодняшний день представляет собой лишь максималистскую установку, практически недоступную, но наиболее удачно отображающую принципиально иную возможную методологию биологического эксперимента — синтетическую методологию. Экспериментальный синтез уже в течение нескольких лет с успехом применяется как в молекулярной, так и в клеточной биологии; направления исследований, для которых характерна синтетическая методология эксперимента, обычно объединяют под общим названием «генетическая инженерия». Такого рода исследования проводятся и на растениях.

За последнее время достигнуты успехи в области «генной инженерии» растений, т. е. науки, основанной на применении технологии рекомбинантных молекул для генетической реконструкции растений. (Правда, это направление все еще значительно отстает от соответствующих геноинженерных работ с микроорганизмами и клетками животных.) У нас нет сомнений в том, что большинство наших представлений о молекулярногенетической организации живых организмов и большинство наиболее радикальных приемов генетической реконструкции живых существ в ближайшие два-три десятилетия будут получены именно благодаря технологии рекомбинантных молекул. На сегодняшний день эта наука применительно к высшим растениям, однако, все еще находится на стадии методических поисков, и можно выделить несколько направлений, по которым достигнут определенный прогресс. Центральным компонентом любой геноинженерной технологии является набор приемов, позволяющих осуществлять перенос генов из одной биологической системы в другую. В отношении высших растений пока что существует лишь один «переносчик» (или, как его называют, вектор) генов — это подаренная нам природой бактерия Agrobacterium, содержащая плазмиды Ti или Ri. Вызывающая опухоли (корончатые галлы) у многих двудольных растений, A. tumefaciens содержит большую плазмиду, часть которой (Т‑район) в процессе опухолевой трансформации включается ковалентно в ядерную ДНК растения. Таким образам, мы имеем в данном случае дело с естественной генетической трансформацией растительной клетки бактериальной ДНК. Механизмы такой трансформации пока что неясны, однако благодаря многочисленным исследованиям, выполненным прежде всего группами Дж. Шелла и М. ван Монтагю в Западной Европе и М.‑Д. Чилтон в США, удалось достаточно хорошо изучить саму плазмиду и даже реконструировать ее, с тем чтобы этот вектор лучше соответствовал тем требованиям, которые к нему предъявляет исследователь. В частности, показано, что гены внутри Т‑района можно значительно изменять и это не сказывается на эффективности трансформации, т.е. найдены участки, куда можно встраивать новые чужеродные ДНК, которые необходимо ввести в геном растения. Трансформированные клетки имеют, как правило, нарушенный баланс фитогормонов, и из них невозможно получить фертильные растения; поэтому с помощью геноинженерных приемов были обнаружены и инактивированы гены Т‑района, контролирующие измененный фитогормональный баланс. Наконец, совсем недавно в Ti‑плазмиду были введены гены бактериальных транспозонов, определяющие устойчивость к антибиотикам канамицину и метотрексату (их поместили под контроль промотора нопалинсинтетазы — одного из генов Т‑района), и трансформированные таким образом растительные клетки оказались устойчивыми к названным антибиотикам; у них наблюдался синтез соответствующих бактериальных ферментов (неомицинфосфотрансферазы и дигидрофолатредуктазы). Таким образом, по крайней мере для двудольных растений уже разработан прием переноса и внедрения в геном растительной клетки чужеродных генов (см. обзоры: Bevan, Chilton, 1982; Chilton, 1982; Molecular biology 1982; Schell et al., 1982; Schell, Van Montagu, 1983; Schroder et al., 1983).

Принципиально иной, видимо более универсальный, путь переноса генов, эффективность которого уже доказана на низших организмах и животных клетках, состоит в клонировании тех или иных растительных генов и пришивании к ним гетерологичных ДНК, которые необходимо ввести в геном растения. Наличие в клетке гомологичных последовательностей ДНК является необходимым условием интеграции чужеродной ДНК. Повысить эффективность проникновения такой ДНК в клетку можно либо с помощью методов микроинъекции, либо упаковывая ДНК в липосомы. (Недавно показан даже перенос генов путем слияния бактерий и эукариотических клеток — Rassoulzadegan et al., 1982.) Имеется целый ряд генов и последовательностей ДНК растений, которые были клонированы и могут выполнять роль участка гомологии:

  • транспозируемые элементы растений (Geiser et al., 1980, 1982; Burr, Burr, 1981 a, b; Chaleff et al., 1981; Doring et al., 1981; обзор Starlinger, 1982; Wienand et al., 1982, и др.);
  • гены алкогольдегидрогеназы (Gerlach et al., 1982; Strommer et al., 1982);
  • сахарозосинтетазы (Burr, Burr, 1981 a, b; Geiser et al., 1982);
  • хальконсинтазы (Wienand et al., 1982);
  • рибулезодифосфаткарбоксилазы (Seyer et al., 1981);
  • гены запасных белков (обзор Brown et al., 1982);
  • гены рибосомальных РНК (Delseny, Penon, 1982);
  • гены актина (Nagao et al., 1981);
  • высокоповторяющиеся последовательности растительной ДНК (Bedbrook, Gerlach, 1980) и другие (см. также список клонированных генов эукариот — Davies, 1982).

Как показывают опыты, генетическая трансформация возможна и с гетерологичными ДНК (см., например, сообщение о трансформации хламидомонады дрожжевой ДНК — Rochaix, Van Dillewijn, 1982). Изучаются также возможности использования вирусов, прежде всего ДНК‑содержащих вирусов растений, в качестве генетических векторов (Howell et al., 1981; Hull, 1981; Shepherd et al., 1981; Hohn, Hohn, 1982).

Естественно, что все вышеназванные исследования носят биотехнологический характер и имеют конечной целью разработку приемов, позволяющих получать более совершенные растения. Можно указать следующие наиболее важные проблемы, на которые «ориентированы» проводимые на высших растениях работы:

  • повышение эффективности фотосинтеза культурных растений;
  • повышение эффективности азотфиксации и расширение круга культурных растений, способных к симбиотической азотфиксации;
  • улучшение качества запасных белков;
  • повышение устойчивости к стрессовым факторам и патогенам.

Решение этих задач на сегодняшний день представляется делом достаточно отдаленного будущего, поскольку наши знания молекулярной биологии и генетики высших растений еще весьма скромны; ближайший эффект геноинженерных исследований и будет состоять в углублении фундаментальных представлений о функционировании растительного организма.

Область исследований высших растений с применением рекомбинантных молекул («генная» генетическая инженерия) — уже вполне оформившаяся наука, адекватное отражение результатов которой потребовало бы написания книги, не меньшей той, которую сейчас держит в руках читатель.

Данная монография имеет целью познакомить с возможностями создания новых форм растений, основанными на применении приемов «клеточной» инженерии. Наше исследование посвящено получению гибридов высших растений с помощью новой экспериментальной техники (парасексуальной гибридизации путем слияния протопластов), а также изучению генетических процессов, обусловленных такого рода гибридизацией, и генетической новизны получаемых растительных форм.

Сущность этого нового способа гибридизации заключается в том, что в качестве родительских используются не половые клетки (гаметы), а клетки тела (сомы) растения. Из них с помощью специальной ферментативной обработки удаляют жесткие полисахаридные оболочки; «голые» клетки (изолированные протопласты), выделенные из родительских организмов, при определенном экспериментальном воздействии заставляют сливаться друг с другом. Из гибридных клеток, полученных таким путем, в дальнейшем регенерируют целые растения‑гибриды. Парасексуальная гибридизация путем слияния протопластов возможна благодаря разработке двух экспериментальных методов, стоящих на стыке физиологии и генетики растений — метода культуры клеток и тканей растений и метода изолированных протопластов.

Возможности, открытые методом культуры клеток и тканей, можно резюмировать следующим образом. Разработаны условия и специальные питательные среды, при помещении в которые изолированные от растения группа клеток или отдельная клетка дедифференцируются (т.е. утрачивают признаки, характерные для ткани, из которой они взяты) и начинают жить и размножаться как независимые одноклеточные организмы. Такого рода неорганизованный рост и размножение клеток in vitro можно поддерживать практически в течение десятков лет. При изменении условий культивирования, в частности изменении содержания фитогормонов в питательной среде, клетки можно вернуть к организованному росту и в конечном итоге заново получить из них целые организмы — растения. Указанные приемы в сущности означают возможность для исследователя с целью решения конкретной проблемы перейти с организменного уровня на клеточный и работать с миллионами и более клеток в пробирке (вместо миллионов растений, занимающих значительно большие площади и требующих значительно больших затрат для постановки опыта), причем в результате эксперимента возможен возврат к целому растению.

Метод изолированных протопластов, разработанный в течение последнего десятилетия, позволяет с помощью ферментативного гидролиза разрушать клеточные стенки и выделять в больших количествах «голые» растительные клетки, лишенные клеточной оболочки и окруженные только плазмалеммой. Такие «голые» клетки — изолированные протопласты, как оказалось, можно вынудить сливаться друг с другом либо поглощать из окружающего раствора макромолекулы (белок, нуклеиновые кислоты) и частицы (изолированные клеточные органеллы, микроорганизмы). Культивирование протопластов в определенных условиях приводит к ресинтезу у них клеточной оболочки, после чего они ведут себя как обычные культивируемые in vitro клетки, в частности способны делиться и образовывать колонии клеток и даже целые растения.

Таким образом, благодаря указанным методам, с одной стороны, можно свободно переходить с организменного уровня на клеточный и обратно; с другой — стадия изолированного протопласта позволяет манипулировать содержимым растительной клетки. Сочетание этих экспериментальных возможностей открывает путь к парасексуальной гибридизации высших растений (т.е. в обход полового скрещивания). К настоящему времени успешные результаты получены только в одном из экспериментальных направлений парасексуальной гибридизации — получении гибридов путем слияния изолированных протопластов; остальные направления (пересадка органелл, введение чужеродной информации в виде макромолекул и т.д. в протопласты) все еще не вышли за рамки чисто методических разработок (см., однако, работы по генетической трансформации протопластов с помощью Ti‑плазмиды Agrobacterium — Davey et al., 1980; Krens et al., 1982).

Гибридизация с помощью слияния соматических клеток (протопластов) растений, составляющая предмет данного исследования, является приемом, сходным с разработанной ранее гибридизацией соматических клеток животных. Имеется, однако, одно фундаментальное различие: метод гибридизации соматических клеток животных позволяет получать гибридную клетку, в то время как слияние протопластов соматических растительных клеток приводит во многих случаях к получению гибридного растения. Благодаря указанному обстоятельству парасексуальная гибридизация не только является новым инструментом генетического анализа, но, по‑видимому, сможет в будущем еще дополнить арсенал приемов практической селекции промышленных сортов сельскохозяйственных растений. До последнего времени и генетик, изучающий организацию аппарата наследственности растений, и селекционер, пытающийся прокормить человечество путем выведения более совершенных сортов растений, обладали единственным инструментом конструирования новых растений — способом природного скрещивания. Наша цель — вооружить их новым способом.

Необходимость разработки нового способа гибридизации диктуется тем обстоятельством, что половое скрещивание представляет собой строго регламентированную систему гибридизации, где в качестве родительских форм можно использовать определенные организмы в определенных сочетаниях. Результатом такой гибридизации являются потомки, имеющие вполне определенные наборы генов. Перечисление основных характеристик полового процесса позволит лучше понять ограничения обычного скрещивания в отношении генетического конструирования растений, что в свою очередь позволит сформулировать задачи, решение которых было бы возможно с помощью парасексуальной гибридизации путем слияния протопластов.

В половом скрещивании принимают участие высокоспециализированные клетки растений — гаметы. Процесс гаметогенеза включает мейотическую редукцию (частичную элиминацию) ядерного генетического материала. Только растительные формы с нормальным морфогенезом и гаметогенезом могут скрещиваться с помощью половой гибридизации. Половой процесс симметричен в том смысле, что гаметы обоих родителей привносят в зиготы гаметофитные наборы ядерного генетического материала. Процесс образования зиготы включает слияние ядер гамет и восстановление спорофитного набора ядерного генетического материала. Каждое отдельное растение-потомок представляет собой продукт упорядоченной хромосомной сегрегации из суммы хромосом родителей. Закономерности сегрегации ядерных признаков объясняются менделевскими правилами. Внеядерные генетические детерминанты у большинства высших растений в половом процессе наследуются строго однородительски и матерински. Число комбинаций жизнеспособных генотипов, которые реально возникают вследствие полового процесса, меньше теоретически возможного из‑за механизмов генеративной несовместимости, Половая гибридизация ограничена филогенетически близкими комбинациями видов растений.

Следовательно, теоретически слияние протопластов и парасексуальная гибридизация могут представлять интерес в том случае, если с помощью этой техники окажется возможным:

  • скрещивать филогенетически отдаленные виды растений (организмов), которые невозможно скрестить обычным половым путем;
  • получать асимметричные гибриды, несущие весь генный набор одного из родителей наряду с несколькими хромосомами (или несколькими генами, или только органеллами и цитоплазмой) другого;
  • создать систему гибридизации, включающую одновременное слияние трех и более родительских клеток;
  • получать гибриды, представляющие собой в генетическом смысле сумму идиотипов родителей;
  • получать растения, гетерозиготные по внеядерным генам;
  • преодолевать ограничения, налагаемые генеративными системами несовместимости;
  • скрещивать формы, которые невозможно гибридизировать половым путем из‑за аномалий в морфогенезе или гаметогенезе родителей;
  • гибридизировать клетки, несущие различные эпигенетические программы.

Важнейшим отличием гибридизации с помощью парасексуальной техники от обычного полового скрещивания является то, что этот новый способ всецело искусственный, и можно теоретически предположить, что часть ограничений, присущая половому скрещиванию, парасексуальной гибридизации не свойственна (например, ограничения, возникающие вследствие неспособности родителей к нормальному гаметогенезу либо вследствие реакции генеративных систем несовместимости). Кроме того, поскольку гибридизация клеток является сложным процессом, состоящим из целого ряда событий, способных приводить к генетическим изменениям: слияние клеток, слияние/неслияние ядер клеток, слияние/неслияние других органелл, селективная деструкция органелл и т.д., и поскольку генотип потомства является функцией всех этих событий, вполне очевидно, что, задавая те или иные параметры искусственного процесса парасексуальной гибридизации, можно предопределить его генетический результат. Придавая очень важное значение предполагаемой управляемости процесса парасексуальной гибридизации, мы намеренно употребляем не термин «гибридизация растений», а более широкое определение «генетическая инженерия растений». Помимо того, что в определении «генетическая инженерия» подчеркнуто креативное присутствие человека, данный термин, с нашей точки зрения, наиболее точно определяет синтетическую, а не аналитическую научно‑философскую методологию данных исследований генетической организации растений. Таким образом, речь идет не только о гибридизации как способе получения новых форм растений, но также о гибридизации как новом синтетическом методе изучения сложных биологических систем.

Техника парасексуальной гибридизации не решает все методические проблемы генетического анализа растительной клетки. Мы укажем здесь лишь на две, с нашей точки зрения, важнейшие. Во‑первых, несмотря на то что техника парасексуальной гибридизации связана с работой на клетках, а не на растениях, эксперименты такого рода занимают чрезвычайно много времени прежде всего потому, что растительные клетки размножаются медленнее, чем животные (длительность клеточного цикла для растительной клетки обычно 25—40 ч), а тем более клетки микроорганизмов; кроме того, возврат к целому растительному организму в большинстве случаев занимает несколько месяцев. По этой причине, например, один эксперимент по получению гибридов Nicotiana путем слияния протопластов с последующим анализом их потомства занимает 1‑1,5 года, и вряд ли какие‑либо экспериментальные приемы помогут эффективно ускорить этот процесс в будущем. Во‑вторых, растительная клетка чрезвычайно лабильна по отношению к разнообразным внешним сигналам, и нежелательным следствием этого является большая генетическая гетерогенность, вызываемая в растительных клетках самими условиями культивирования. Указанная гетерогенность усложняет анализ генетических событий, вызываемых собственно гибридизацией, накладываясь на спектр разнообразных гибридных форм при парасексуальной гибридизации; она же может оказаться серьезной помехой для практического использования слияния протопластов с целью создания селекционного материала.

Основой для подготовки данной книги послужила опубликованная нами в 1982 г. монография «Слияние протопластов и генетическое конструирование высших растений» — первая в мировой научной литературе сводка результатов работ по генетической (клеточной) инженерии растений. Читатель, однако, заметит, что нынешнее издание отличается от предыдущего коренным образом. Во‑первых, предыдущая монография была посвящена изложению главным образом наших собственных исследований по соматической гибридизации растений. Поэтому имело смысл подготовить более широкую сводку, трактующую более или менее «равномерно» все накопленные в этой области исследований результаты. Во‑вторых, за время, прошедшее с момента подготовки упомянутой монографии, общее количество публикаций по клеточной инженерии растений возросло более чем вдвое. Соответственно, значительное число выводов и обобщений, носивших два‑три года тому назад гипотетический характер или подкрепленных лишь единичными экспериментами, сегодня получило свое достаточно полное обоснование. В‑третьих, благодаря опять‑таки значительно возросшему количеству работ, появилась возможность ввести в настоящую книгу главу по мутантам соматических клеток, а также раздел, посвященный практическому использованию соматической гибридизации растений. В конце книги помещен словарь специфических терминов. Мы уверены, что благодаря указанным изменениям настоящее издание станет значительно более широким, т.е. будет представлять интерес для биологов многих специальностей. Поскольку книга, которую сейчас держит в руках читатель, написана более чем наполовину заново, нам казалось вполне правомерным дать ей новое название.

Оглавление

ВВЕДЕНИЕ 3

ГЛАВА 1. ТЕХНИКА ПАРАСЕКСУАЛЬНОЙ ГИБРИДИЗАЦИИ 9
1.1. Культура изолированных протопластов . 9
1.1.1. 9
1.1.2. Культура единичных клеток и протопластов 16
1.2. Стадия изолированного протопласта и конструирование растительной клетки... 17
1.2.1. Слияние протопластов . . . 17
1.2.2. Реконструкция клетки при слиянии субпротопластов 19
1.2.3. Модификация клеток при поглощении изолированных клеточных органелл протопластами растений 21
1.3. Генетическая изменчивость растительных клеток в связи с манипуляциями in vitro .... 22
1.3.1 .22
1.3.2. Генетические изменения в клетках в связи со стадией изолированного протопласта 23

ГЛАВА 2. КЛЕТОЧНАЯ БИОТЕХНОЛОГИЯ: МУТАНТЫ КЛЕТОК РАСТЕНИЙ 25
2.1. Приемы селекции мутантов 25
2.1.1. Возможности и ограничения традиционных схем 25
2.1.2. Сомаклональные варианты . 26
2.1.3. Методы селекции в культуре in vitro 28
2.1.4. Сохранение вариантных клеточных линий 30
2.2. Мутанты, полученные с помощью культуры клеток и протопластов . . 31
2.2.1. Устойчивость к аминокислотам и их аналогам ............... 31
2.2.2. Устойчивость к аналогам азотистых оснований 33
2.2.3. Устойчивость к аминоптерину и метотрексату 34
2.2.4. Устойчивость к антибиотикам 34
2.2:5. Ауксотрофные мутанты 35
2.2.6. Устойчивость к хлорату/дефектность по нитратредуктазе 36
2.2.7. Варианты, растущие на неутилизируемых сахарах . 37
2.2.8. Температурочувствительные мутанты 38
2.2.9. Гормоннезависимые варианты 38
2.2.10. Пигментные мутации 39
2.2.11. Устойчивость к стрессовым факторам . 39
2.2.12. Устойчивость к гербицидам 40
2.2.13. Устойчивость к патотоксинам 41
2.2.14. Другие мутации/вариации 42

ГЛАВА 3. СЛИЯНИЕ ПРОТОПЛАСТОВ И ПАРАСЕКСУАЛЬНАЯ ГИБРИДИЗАЦИЯ ВЫСШИХ РАСТЕНИЙ 44
3.1. 44
3.1,1. Терминология 44
3.1.2 45
3.2. Методы селекции парасексуальных гибридов 49
3.2.1. .49
3.2.2. Генетическая комплементация 50
3.2.3. «»Физиологическая комплементация«» 52
3.2.4. Механическая изоляция 54
3.2.5. Инактивация биохимическими ядами й облучением как компоненты селекции соматических гибридов 55
3.2.6. Физическое обогащение . . . . 56
3.3. Частота возникновения парасексуальных гибридов . 56
3.4. Слияние протопластов и расширение рамок скрещиваемости 59
3.5. Методы анализа процесса пар асексуальной гибридизации и генетической природы форм растений, возникающих при слиянии протопластов 59
3.5.1 59
3.5.2. Генетические методы анализа 61
3.5.3. Биохимические методы анализа . 63

ГЛАВА 4. ТРАНСМИССИОННАЯ ГЕНЕТИКА ПАРАСЕКСУАЛЬНОЙ ГИБРИДИЗАЦИИ (БЛИЗКОРОДСТВЕННЫЕ СКРЕЩИВАНИЯ) 67
4.1. Основные представления о судьбе генов при гибридизации соматических клеток
4.1.1. . 67
4.1.2. Первые работы по трансмиссионной генетике парасексуальной гибридизации 67
4.1.3. Гибридизация в результате слияния трех и более клеток . . 71
4.2. Судьба внеядерных генетических детерминант 73
4.2.1. 73
4.2.2. Слияние протопластов и образование цитоплазматических гетерозигот 75
4.2.3. Митотическая сегрегация плазмагенов и выщепление родительских форм 84
4.2.4. Рекомбинация плазмагенов 87
4.3. Судьба ядерных генов в процессах соматической гибридизации 90
4.3.1. Сегрегация ядер в гибридных клетках 90
4.3.2. Хромосомные наборы гибридных клеток . . . . 95
4.3.3. Поведение ядерных генов соматических гибридов в половых (гибридологических) скрещиваниях 97
4.4. Трансмиссионная генетика систем гибридизации в условиях применения инактивации клеток 98
4.4.1. . . 98
4.4.2. Обработка моноиодацетатом 99
4.4.3. Облучение 100
4.5. Генетическое разнообразие форм растений, возникающих при слиянии протопластов 101

ГЛАВА 5. СЛИЯНИЕ ПРОТОПЛАСТОВ И ГИБРИДИЗАЦИЯ ОТДАЛЕННЫХ ВИДОВ РАСТЕНИЙ 102
5.1. . 102
5.2. Исследование начальных этапов культуры гибридных клеток филогенетически отдаленных видов растений 102
5.3. Межсемейственные гибриды клеток высших растений 104
5.4. Межтрибные гибриды высших растений 106
5.4.1 106
5.4.2 110
5.4.3. 114
5.4.4. Зачем нам нужны «»монстры«»? 115
5.5. Межродовые гибриды 117
5.6. Применение различных физических и химических факторов с целью воздействия на судьбу генетического материала филогенетически отдаленных гибридов . . . . 119
5.6.1 . . . . 119
5.6.2. Облучение и индукция асимметричности 119
5.6.3. Использование химических веществ для индукции митотической сегрегации хромосом 120

ГЛАВА 6. ИСПОЛЬЗОВАНИЕ СОМАТИЧЕСКОЙ ГИБРИДИЗАЦИИ 121
6.1. Генетический анализ с помощью парасексуальной гибридизации 121
6.1.1 121
6.1.2. Анализ природы наблюдаемых изменений 122
6.1.3. Анализ ядерных генов 124
6.1.4. Анализ внеядерных генов 124
6.1.5. Анализ механизмов митотического цикла. Пространственное разделение родительских геномов в гибридных ядрах и его наследование 129
6.1.6. Анализ механизмов дифференцировки и морфогенеза 131
6.2. Практическое использование гибридизации соматических клеток 132
6.2.1. . . . .132
6.2.2. Преодоление несовместимости при межвидовой гибридизации 134
6.2.3. Реконструкция цитоплазмона 135
6.2.4. Пересадка цитоплазмона 136

ЗАКЛЮЧЕНИЕ . . ,

СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ . . 141

СЛОВАРЬ ТЕРМИНОВ. . 154


Особисті інструменти
Простори назв

Варіанти
Дії
 
   
Інструменти